Як здати аналізи на ВІЛ ПЛР?
Опубликованно 14.02.2019 00:15
Згідно зі статистикою ВООЗ, за 40 останніх років 25 млн людей померли від Сніду. Збитки від цієї інфекції колосальний. Найбільше заражених виявилося в країнах Африки, звідки і пішла ця інфекція. При ВІЛ стає особливо актуальною діагностика захворювання. Правда, засобів для лікування ВІЛ ще не створено, але рано розпочата терапія може подовжити термін життя пацієнта і поліпшити її якість. Діагностика інфекції ВІЛ
ВІЛ-інфекція визначається на різних етапах наступними методами: ІФА - імуноферментний аналіз. Вестерн-блот. ПЛР - полімеразна ланцюгова реакція. Експрес-тести.
Метод ПЛР був розроблений американським біохіміком Кері Муллисом, який отримав за це в 1983 році Нобелівську премію. Сьогодні цей метод в медицині при діагностиці всіх інфекцій вважається провідним у силу своєї точності та інформативності. ВІЛ в цьому плані не виняток.
Суть аналізу
Будь-яка жива клітина містить РНК і ДНК. Ці нуклеїнові кислоти здатні до самокопированию і самовідтворення. Для кожної інфекції фрагменти ДНК унікальні. У біологічних рідинах ці уламки нуклеїнових кислот циркулюють. Вони уловлюються і розпізнаються спеціальною апаратурою - реактором. Це і є основа методу. Лаборант веде підрахунок цих фрагментів. У ретровірусу ВІЛ відстежують РНК. Навіть при одиничних копіях вірусних частинок ПЛР може їх знайти і порахувати.
В якості досліджуваної рідини найчастіше використовується венозна кров. Спеціальні компоненти методу вступають у зв'язок з частинками вірусу і роблять їх обумовленими, бо відбувається багаторазове збільшення знайдених фрагментів.
У випадку з ВІЛ результат наявності вірусу можна отримати задовго до того, як з'явиться клініка. Тому в силу своєї високої чутливості ПЛР має таке високе діагностичне значення. Величезний плюс ПЛР полягає в універсальності методу. Інкубаційний період інфекції для ПЛР не перешкода.
Вартість дослідження
Метод ПЛР – досить дорогий. У цьому полягає один з його великих мінусів. Для його проведення потрібна новітня апаратура і висока кваліфікація лікаря-лаборанта. В силу сказаного ПЛР-діагностика не виконується в невеликих населених пунктах. Здати аналіз можна тільки в спеціалізованих великих клініках.
Вартість визначення ДНК ВІЛ у клініках Москви від 2 800 рублів, з'ясування з допомогою ПЛР вірусного навантаження (РНК вірусу в плазмі) – від 8 800 рублів, а резистентності ВІЛ до інгібіторів протеази – від 16 500 рублів. Як бачимо, ціни досить високі. ПЛР можна провести безкоштовно в державних поліклініках за полісом ОМС. Важливо, що процедуру можна зробити анонімно. В реєстратурі пацієнт отримує номер, за яким він зможе дізнатися результат. В сучасних медцентрах є особисті кабінети клієнтів, куди ці дані будуть внесені.
Цілі дослідження
ПЛР-діагностику на ВІЛ призначають у таких випадках: Виявлення інфекції у дитини, народженої від матері або носительки, щоб визначити внутрішньоутробне інфікування. Якщо ІФА дав сумнівні результати (ПЛР на ВІЛ допомагає в цьому випадку поставити остаточний діагноз). Для виявлення кількісного вмісту вірусу в організмі. При позитивному імуноблотингу – вони з ПЛР доповнюють один одного. Тестування донорів. Для ранньої діагностики ВІЛ. Для визначення ефективності і резистентності до АРВТ.
Перевага зазначеного аналізу і в тому, що ПЛР на ВІЛ можна проводити навіть дітям до року.
Дослідження частіше виконують не для первинної діагностики, а вже в процесі лікування. Первинна діагностика – це серологічні дослідження (при них визначають рівень антитіл до ВІЛ). При хибно-позитивний результат його повторюють – це може бути при низькій вірусного навантаження.
ПЛР діагностує ВІЛ, коли ще немає до нього антитіл. Метод ІФА в цьому випадку не дасть відповіді.
А ПЛР на ВІЛ буде позитивним. Але симптоми даного періоду ВІЛ неспецифічні. Пацієнт спочатку довго і безуспішно лікується з приводу ГРВІ у терапевта. Слід мати на увазі, що діагноз ВІЛ тільки на підставі ПЛР не ставиться, необхідно проходження та інших комплексних тестів. Метод ПЛР частіше служить допоміжним для складних випадків.
Підготовка до аналізу
Перед тим як здати ПЛР на ВІЛ, за 2 дні до аналізу потрібно не вживати жирну їжу, алкоголь. Також краще психічно і фізично не напружуватися. Якщо пацієнту призначено курс імуностимуляції, його припиняють за 2 тижні до аналізу.
Кров краще здавати в ранкові години. Досліджувати можна і інші біологічні рідини організму (сперму, секрет вагіни), але найкращим матеріалом є кров. Слину, піт, сечу і сльози не використовують, так як вміст вірусу в них мінімально. Плюси ПЛР при ВІЛ
Перевагами методу є дуже мала ймовірність хибних результатів результату, універсальність реакції для будь-яких біологічних рідин організму. Аналіз має широкий спектр: Один забір крові можна використовувати для виявлення різних інфекцій. Методика відноситься до термінових, результат буває готовий вже на наступний день. Достовірність становить від 85 до 98%. Наявність ВІЛ можна визначити через 10-14 днів після зараження (антитіл при цьому терміні ще немає). Немає вікових обмежень, проводити можна одразу з моменту народження.
Мінуси методу
Недоліки ПЛР полягають у наступному: Дорожнеча аналізу. Необхідне складне медичне обладнання. Потрібна висока кваліфікація лаборанта і лікаря, який бере аналіз. Реакція високочутлива, тому похибка може становити 20%. Може вийти хибнопозитивний результат, якщо у пацієнта є аутоімунні процеси, онкологія, хронічні інфекції. Необхідна особлива чистота приміщення лабораторії, тому що вірус може потрапити в аналіз з повітря. Тоді результат буде неправильним.
Для лабораторій, в яких проводиться ПЛР, для поліпшення якості діагностики розроблені спеціальні жорсткі заходи по системі Санпіну на внутрішній контроль. Крім того, повинні бути дотримані всі правила роботи при такій методиці: Потрібно строго стежити за інформацією на пробірках. Перед забором крові знову подивитися і переконатися в призначенні аналізу. Медсестра повинна зробити правильну маркування пробірок. Лікар-лаборант повинен правильно провести всі маніпуляції з біоматеріалом, щоб не допустити перехресне забруднення. Тест-система повинна бути відмінної якості.
Тільки при дотриманні всіх цих умов похибка у відповіді може скласти лише близько 2% епізодів.
Тривалість аналізу
Багато хто цікавиться, через скільки ПЛР на ВІЛ буде готовий. Діагностування триває не більше 8 годин. Відповідь пацієнт може отримати вже на наступний день. Експрес-тестування виконують протягом 2 годин. Достовірність ПЛР
Незважаючи на масу переваг, ПЛР не вважається ідеальним методом діагностування. До нього звертаються у разі необхідності отримання скринінгових тестів на наявність ВІЛ в організмі. Коли беруть кров на аналіз?
Через скільки здавати ПЛР на ВІЛ? Достовірний результат можна отримати вже при взятті крові через 4-4 днів після інфікування. Через 2 тижні достовірність на ВІЛ становитиме 98%, а при терміні 5 днів – 80%. Наявність при ПЛР на ВІЛ негативного результату буде достовірним, але для абсолютно точного результату проводять і ІФА.
Аналіз ІФА буде результативним лише за наявності антитіл до вірусу, цей час може займати від 1-3 місяців до півроку. Так як ІФА дає ймовірність вище (98%-99,9%), ПЛР не можна назвати 100% підтверджує аналізом на наявність ВІЛ-інфекції. Але зате це єдина методика, при якій не потрібно чекати появи антитіл.
При ВІЛ методом ПЛР можна отримати відомості про ефективність АРВТ, про стадії захворювання на ВІЛ та кількості ВН (кількісна оцінка знаходження ВІЛ в організмі). Це буде говорити про тяжкості і ступеня змін.
Здати аналізи на ПЛР при ВІЛ потрібно і в тому випадку, якщо антитіла в крові є, але їх наявність не вказує на достовірність ВІЛ-інфікування клінічно.
Здають аналіз не тільки при зараженні і випадкового статевого зв'язку. Інші приводи: Планування вагітності. Майбутня операція. Випадковий статевий зв'язок. Деякі професії вимагають здачі цього аналізу для допуску на роботу (педагоги, лікарі та інший медичний персонал). В'язні. Хворі на ТБ. Працівники МНС і поліції. Повернулися після відпустки з екзотичних країн (при бажанні упевнитися, що немає інфікування). Повії. Іноземні студенти. Наркомани.
Також до здачі аналізу на ВІЛ може змусити певна симптоматика у пацієнта: Різка втрата ваги. Діарея, що триває більше 3 тижнів. Безпричинне підвищення температури протягом тривалого часу. Збільшення лімфовузлів. З'ясована причина пневмонії, кандидозу та ін.
Розшифровка аналізу – прерогатива лікаря, а не лаборанта.
ПЛР або ІФА, що краще?
При ПЛР-діагностики ВІЛ РНК вірусу виявляється і якісно, і кількісно. Цей аналіз чітко ідентифікує конкретний патоген навіть за умови наявності декількох перехресно реагируемых. Біологічний матеріал можна використовувати навіть в засохлому вигляді. Мінус же в високій чутливості ПЛР, коли хибнопозитивний результат може дати і присутність на інструментах або пробірці навіть мізерної кількості стороннього ДНК.
Завдання і можливість ІФА – визначення наявності антитіл до ретровирусу. Хоча його точність 99%, на ранніх стадіях він непридатний. Якісний аналіз на ВІЛ
Проведення якісного ПЛР на ВІЛ визначає присутність вірусу в організмі. Результати в цьому випадку будуть виглядати наступним чином: позитивний, хибно-негативний. Але дане дослідження не дасть дані про кількість ретровірусу. Такий якісний аналіз недоцільний тоді, коли вже виявлена ВІЛ-інфекція в організмі іншими способами.
Контролювати результативність лікування якісним ПЛР неможливо. Кількісний аналіз на ВІЛ
Проводиться вже тільки ВІЛ-інфікованим з метою підрахунку кількості копій РНК вірусу в біопрепаратів.
Мета такого дослідження - моніторинг проведеного лікування та виявлення резистентності вірусу до нього. Противірусна терапія у таких обчисленнях не призначається лікарем наосліп, тому буде більш ефективною. Кількісний ПЛР на ВІЛ-інфекцію роблять набагато частіше. Відображається цей аналіз копією/мл крові.
Які результати можуть бути видані: РНК вірусу відсутнє або його дуже мало (близько 20 копій/мл). Немає достовірності діагнозу. Від 20 – до 10 у 6 степені копій/мл – достовірний діагноз. Більш ніж 10 у 6 степені копій/мл - велика ВН.
Лабораторії можуть виконувати аналіз ПЦР на ВІЛ в режимі Real-time. Це передбачає спостереження і чисельну оцінку накопичення продуктів ПЛР при автоматичної фіксації результатів. Автор: Кім Захидахон 15 Листопада, 2018
Категория: Здоровье
Як здати аналізи на ВІЛ ПЛР?